Endo Tribune France No. 1, 2019

Actus produits / Préparation a minima d’une cavité d’accès en endodontie : Quand ? Comment ? Pourquoi ? / Photodommages de cellules souches de pulpe dentaire pendant l’exposition au laser 700 fs

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ENDO TRIBUNE
The World’s Endodontics Newspaper · Édition Française

FÉVRIER 2019 | VOL. 11, NO. 2

www.dental-tribune.fr

ACTUS PRODUITS

CAS CLINIQUE

Ce ciment d’obturation à base de MTA est bioactif et provoque
un fort relargage d’ions calcium. Il favorise un pH
élevé et induit également la formation d’hydroxyapatite. Il assure une
étanchéité parfaite en une seule
séance dû à son temps de prise rapide.
” Page 9

La réussite du traitement endocanalaire dépend de l’identiﬁcation, de l’exploration et du traitement du système complexe des canaux radiculaires dans
ses moindres détails. Or, il est possible de préparer des cavités d’accès
par une technique conservatrice.
” Page 10

Les radicaux destructeurs de l’oxygène sont formés durant
l’exposition à un rayonnement dont la
durée des impulsions est de 700 fs. Une
puissance moyenne signiﬁcativement
supérieure est nécessaire pour parvenir
à une telle formation.
” Page 14

> Calasept EDTA et Calasept CHX > MTA Bioseal
Directa
L’irrigation canalaire par Calasept
Dans la game de produit Calasept les laboratoires Directa conçoivent
2 solutions d’irrigations en particuliers: Calasept EDTA et Calasept CHX.
Ils se présentent dans un emballage contenant des adaptateurs spéciﬁques qui permettent un remplissage facilité des seringues du même
nom, disponibles dans deux teintes clairement distinctes.
Calasept EDTA est spécialement conçu aﬁn de faciliter la négociation
des courbures des canaux radiculaires par les instruments endodontiques. L’EDTA intervient comme un chélateur qui facilite la décalciﬁcation par dissolution des boues dentinaires, permettant ainsi non seulement une augmentation de l’adhérence des matériaux de remplissage,
mais aussi contribue simultanément à élargir la forme du canal pour
l’obturation.
Durant les traitements l’EDTA est utilisé par intermittence avec l’hypochlorite de sodium.Les études in vitro ayant permis d’établir que le
pouvoir chélateur de l’EDTA n’était pas altéré par l’usage d’hypochlorite.
En revanche il ne faut pas associer l’hypochlorite de sodium à
Calasept CHX car alors un précipité apparaîtrait qui serai indélogeable sans autre atteint des
tissus sains minéralisés restants, Calasept CHX étant un composé à base de chlorexidine.
Ainsi le laboratoire Directa recommande une irrigation au Calasept CHX avant un remplissage avec un matériau résineux.
Enﬁn les seringues Calasept se présentent avec un réservoir de 3 ml et sont de couleurs
verte et blanche pour éviter une confusion des produits.

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de MTA
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Ciment d’obturation canalaire à base de
MTA (13%). Facile d’usage : il sufﬁt d’enduire le
canal avec lime de faible diamètre, et le maître
cône de Gutta au moment de l’obturation.
Ainsi il complète l’étanchéité canalaire et est
radio opaque.
Bioactif, il va provoquer un fort relargage
d’ions calcium (9,15 ppm après 24h), favorisant pH élevé (9,3 après 24h, proche d’un hy-

droxyde de
calcium qui est
aux alentours de 12)
perturbant les bactéries acidophiles.
Induisant de plus
une reminéralisation il
sera très apprécié dans les cas de résorptions.
Enﬁn son temps de prise de 15 minutes assure
un temps de travail inférieur à 25 minutes.
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Franche-Comté) ils sont tous les deux équipés de technologie de dernière génération. Dual
Move est un moteur sans ﬁl, étudié pour offrir un maximum de liberté et de confort aux praticiens. Léger, idéalement équilibré, silencieux, il comporte un écran parfaitement lisible dont
l’afﬁchage peut être inversé pour s’adapter aux utilisateurs gauchers. Le contre-angle rotatif à
340° sans démontage est doté d’une tête miniature et d’un col ﬁn, permettant d’accéder aux
dents postérieures, tout en conservant une visibilité optimale sur les entrées canalaires et la
zone de travail. Les combinaisons de fonctions (en particulier
lorsqu’il est connecté à Dual Pex) et le nombre important de
paramètres ajustables au travers d’une interface intuitive,
font de Dual Move un outil nomade qui s’adapte aux pratiques individuelles. Il permet à la fois les mouvements en
réciprocité et ceux en rotation continue.
Dual Pex est un localisateur d’apex électronique extrêmement ﬁable et très simple d’utilisation. Sa technologie à
4 fréquences permet d’estimer une longueur de travail
lorsqu’il est utilisé seul, ou de surveiller la position d’une
lime dans le canal radiculaire lorsqu’il est combiné avec
Dual Move, avec une précision indépendante des conditions internes du canal exploré (environnement sec ou humide, discontinuité de contact intime de la lime avec les parois canalaires, etc.) L’espace situé entre la constriction apicale et le foramen apical est segmenté en sept pas distincts,
pour garantir un suivi beaucoup plus ﬁn de la progression de la
lime vers le point limite.

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CAS CLINIQUE

Implant Tribune Édition Française | Février 2019

Préparation a minima d’une cavité d’accès en
endodontie : Quand ? Comment ? Pourquoi ?
Dr Alfredo Landolo, Italie, et Dr Dina Abdel Latif, Égypte

1a–c

2a–d

Figs. 1a–c : Nettoyage des cornes pulpaires au moyen d’un insert ultrasonique conçu pour la chirurgie endodontique. | Figs. 2a–d : Nettoyage des cornes pulpaires au moyen d’un insert ultrasonique.

Introduction
Les bactéries et leurs sous-produits sont
les facteurs principalement à l’origine d’infections des régions pulpaires et périapicales.1 L’endodontie moderne vise à éliminer
ou à réduire la charge bactérienne jusqu’à
des niveaux compatibles avec le processus
de cicatrisation,2 ce qui peut être accompli
par une mise en forme adéquate des canaux
radiculaires et leur nettoyage méticuleux
dans les trois dimensions, puis par l’obturation complète du système complexe des canaux à l’aide de gutta-percha thermoplastique.3, 4 Les techniques susmentionnées

permettent de traiter une pulpite irréversible ou d’éliminer une lésion périapicale
et/ou latérale d’origine endodontique. Cependant, même si le traitement est réalisé
convenablement, son taux de réussite à
court ou à long terme ne peut être garanti
sur le plan structural.
L’une des causes majeures des échecs
postopératoires du traitement endocanalaire, dont l’issue est l’extraction de la dent
traitée, est la fracture causée par un
volume insufﬁsant de structure dentaire
résiduelle. En conséquence, une longévité
accrue de la dent traitée sera assurée si le

traitement endocanalaire moderne est
effectué correctement, selon le concept
d’accès minimalement invasif, qui ouvre
l’espace nécessaire à l’exploration et
permet de conserver une bonne partie de
la structure dentaire.
La réussite du traitement endocanalaire
dépend de l’identiﬁcation, de l’exploration
et du traitement complet du système complexe des canaux radiculaires dans ses
moindres détails. L’objectif peut être atteint si l’on possède les connaissances requises et si l’on examine le système canalaire anticipé au moyen des technologies

les plus récentes. Au cours des dernières
années, la préparation minimale d’une
cavité d’accès et ses inconvénients ont suscité de nombreux débats. Le but de cet article est de décrire quand il est possible de
préparer des cavités d’accès par une technique conservatrice lors d’un traitement
endocanalaire, comment les préparer et
pourquoi le faire.

Quand ?
Une cavité d’accès minimalement invasive ne peut être préparée que si toutes les
conditions suivantes sont réunies :
– Examen visuel direct de tout le plancher
de la cavité pulpaire et possibilité d’explorer entièrement l’anatomie de la cavité
pulpaire.
– Possibilité de localiser toutes les entrées
canalaires anticipées.
– Élimination totale de toute calciﬁcation
présente sur le plancher de la cavité
pulpaire.
– Possibilité de préparer les isthmes dans les
prémolaires pourvues de deux canaux radiculaires.
– Parallèlement, possibilité de préparer les
isthmes mésiaux dans les molaires inférieures.
– Accès permettant l’exploration et le nettoyage de la cavité pulpaire sans supprimer les cornes pulpaires et avec élimination minimale du plafond.
Compte tenu de ces divers facteurs, les cas
cliniques où la préparation d’une cavité
d’accès par une technique conservatrice est
recommandée vont être examinés dans la
suite de cet article.

Figs. 3a–c : Nettoyage de l’isthme au moyen d’un insert ultrasonique conçu pour la chirurgie endodontique. Après préparation d’un accès mésial pour préserver la face occlusale, l’insert a été utilisé pour éliminer toute calciﬁcation et effectuer la mise en forme de l’isthme. | Figs. 4a–c : Nettoyage de l’isthme au
moyen d’un insert ultrasonique conçu pour la chirurgie endodontique. Après préparation d’un accès mésial pour préserver la face occlusale, l’insert a été
utilisé pour éliminer toute calciﬁcation et effectuer la mise en forme de l’isthme.

Dents touchées par une pulpite irréversible ou une nécrose due à des cavités de
classe V
L’élimination de la lésion carieuse permet
d’obtenir une face occlusale saine et il est
donc recommandé de préparer la cavité
d’accès par une technique conservatrice
aﬁn de préserver la structure dentaire. Ceci
s’applique également aux dents touchées
par une pulpite irréversible ou une nécrose
dues à une carie proximale n’atteignant pas
la face occlusale. Après un curetage complet
totale de la lésion carieuse, il est possible
d’étendre quelque peu la préparation occlu-

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CAS CLINIQUE

Implant Tribune Édition Française | Février 2019

Fig. 5 : Radiographie périapicale préopératoire de la dent 16 qui présentait une lésion carieuse en mésial. | Fig. 6 : Nettoyage des cornes pulpaires au moyen
d’un insert ultrasonique. | Fig. 7 : Radiographie périapicale postopératoire laissant apparaître la structure dentaire préservée. | Fig. 8 : Radiographie périapicale postopératoire laissant apparaître la structure dentaire préservée.

sale pour effectuer le traitement endocanalaire par le biais d’une cavité mésiale ou distale.

vatrice pour des raisons structurales et esthétiques.

Dents touchées par une pulpite irréversible ou une nécrose résultant d’une préparation effectuée sous des couronnes ou des
bridges
Dans ces cas, si la pathologie pulpaire est
due à la préparation des dents, si aucune
lésion carieuse n’est présente et si la couronne ou le bridge possède des limites marginales bien déﬁnies, l’idéal est de préparer
une cavité d’accès par une technique conser-

Dents touchées par une pulpite irréversible ou une nécrose causée par des lésions
endoparodontales ne présentant aucune
ou une très légère carie occlusale.
Une maladie parodontale grave peut entraîner une pathologie pulpaire alors que la
structure dentaire est encore saine et intacte. Dans ce cas, une petite cavité d’accès
préparée par une technique conservatrice
peut permettre de préserver l’intégrité des
dents atteintes. Ceci s’applique également

10a

10b

11a

Comment ?
Le concept de préparation conservatrice
de cavités d’accès ne peut être mis en
œuvre que si le praticien possède une expérience sufﬁsante et fait appel à des technologies modernes, telles que le recours à
un microscope opératoire dentaire, des inserts ultrasoniques, des limes rotatives en
nickel titane et un nettoyage dans les trois
dimensions. Seuls un fort grossissement et
un éclairage efﬁcace permettent de visualiser tout le plancher de la cavité pulpaire,
tous les oriﬁces des canaux radiculaires, les
canaux principaux, les canaux accessoires
et de quelconques obstructions, notamment des calciﬁcations, au travers de la petite cavité d’accès. L’utilisation du microscope opératoire est donc essentielle lors
de la préparation de ces petites cavités
d’accès.
La préparation d’une cavité d’accès
par une technique conservatrice est effectuée sous microscope opératoire au moyen
de fraises longues et de petit diamètre
(0,8–1,0 mm) aﬁn d’augmenter la visibilité
lors de la pénétration de la cavité pulpaire.
Après la pénétration, une irrigation à l’hypochlorite de sodium est effectuée aﬁn
d’éliminer tout débris. Ensuite, une lime K
de petit diamètre (0,08 mm) est utilisée
pour sonder et explorer les canaux radicu-

12a

12b

12c

12d

11b

Figs. 9a et b : Radiographie périapicale préopératoire de la dent 26, touchée par une pulpite irréversible, pour laquelle une cavité d’accès a été
préparée par une technique conservatrice sous la
restauration coronaire. | Figs. 10a et b : Sous grossissement il est possible d’examiner et d’éliminer
la calciﬁcation et d’exposer le canal mésiovestibulaire (MB). | Figs. 11a–c : L’isthme a été
préparé sous grossissement au moyen d’un
insert ultrasonique et le second canal mésiovestibulaire (MB2) a été exposé.
11c

aux cas de dents touchées par une pulpite
irréversible ou une nécrose due à un traumatisme ou à des contraintes occlusales à
haut risque.

laires. Par la suite, toutes les calciﬁcations
sont localisées sous grossissement puis éliminées au moyen d’inserts ultrasoniques. Si
certains des canaux radiculaires ne sont pas
identiﬁés à ce stade, des inserts ultrasoniques peuvent faciliter leur localisation
après une incision dans le plancher de la
cavité pulpaire.
L’un des points importants de la préparation classique d’une vaste cavité d’accès est
la suppression totale du plafond de la cavité
pulpaire (qui est importante pour éviter la
contamination bactérienne due aux résidus
de tissu pulpaire ). Les techniques modernes
de préparation conservatrice de cavité
d’accès permettent toutefois d’éviter cette
élimination excessive de la dentine grâce au
nettoyage complet de la totalité du plafond,
sans laisser le moindre résidu de tissu
pulpaire. Cette préparation peut être effectuée à l’aide d’inserts ultrasoniques endodontiques. Dans ce cas, il est recommandé
d’utiliser un petit insert ultrasonique
pourvu d’une extrémité ronde diamantée
ou un insert ultrasonique conçu pour la
chirurgie périapicale. Ces inserts ultrasoniques particuliers peuvent nettoyer les
cornes pulpaires et les résidus du plafond
sans éliminer la précieuse structure dentaire (Figs. 1 et 2).
Un élément supplémentaire, qui était notable par le passé, concerne l’introduction
des limes dans les canaux radiculaires, qui
doit être réalisée selon une direction perpendiculaire à la face occlusale de la dent.
Pour parvenir à pénétrer dans les canaux, il
est nécessaire de sacriﬁer une certaine
quantité de structure dentaire saine. La préparation conservatrice de la cavité d’accès
permet d’entrer dans les canaux selon un
angle perpendiculaire au tiers coronaire du
canal, comme l’illustre la Figure 1b. De plus,
l’utilisation des limes rotatives modernes,
précourbées et fabriquées dans des alliages
superélastiques même en phase martensitique (phase de repos), permet de pénétrer
dans les canaux radiculaires d’accès difﬁcile
sans risque de fracture.
Ce n’est qu’après avoir examiné l’anatomie réelle de la cavité pulpaire qu’il est possible de procéder à la mise en forme du canal radiculaire puis de passer aux phases de
nettoyage et au scellement dans les trois dimensions. Grâce aux derniers protocoles
d’activation des solutions d’irrigation, il est
possible d’assurer un nettoyage plus précis
et en profondeur. Ces protocoles sont notamment l’activation ultrasonique, l’activa-

Figs. 12a-d : Les quatre canaux après l’obturation. P = palatin ; MB2 = second mésio-vestibulaire ; MB =
mésio-vestibulaire ; DB = disto-vestibulaire.

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CAS CLINIQUE

Implant Tribune Édition Française | Février 2019

tion sonique, le chauffage interne, le laser et la technique dite de « pression apicale négative ».

Pourquoi ?
Mais pourquoi se compliquer la vie ? C’est là l’une
des questions qui reviennent le plus souvent quand
il s’agit de préparer un accès selon un concept conservateur. La réponse est simple : puisque la conception
de l’accès proposée dans le présent article n’est pas
une situation extrême, et pour autant qu’elle soit accomplie avec l’expérience voulue et les technologies
les plus récentes, dans le respect de tous les paramètres susmentionnés, elle permet d’éviter les erreurs iatrogènes. Non seulement, la dent sera traitée
selon une approche saine et sûre qui préservera la
précieuse structure dentaire, mais le taux de réussite
à court et à long terme sera également bien meilleur.
Les Figures 3–13 illustrent la préparation d’une cavité
d’accès par une technique conservatrice et ses applications aux cas cliniques.

Conclusion

Fig. 13 : Radiographie post-opératoire.

Si grâce à la cavité d’accès préparée par une technique conservatrice, on parvient à éliminer la totalité
de la lésion carieuse, à examiner tout le plancher
pulpaire, à explorer l’ensemble des entrées canalaires, à préparer et à nettoyer les isthmes, et à supprimer toute calciﬁcation présente, on peut alors obtenir d’excellents taux de réussite à court et à long
terme. Par-dessus tout, la préservation de la précieuse structure dentaire saine sera assurée contrairement au concept d’accès classique.
Certes, pour préparer ces cavités d’accès par une
technique conservatrice, le praticien doit posséder

une expérience clinique sufﬁsante. Mais l’utilisation
des technologies modernes, en particulier le microscope opératoire dentaire, les inserts ultrasoniques,
les limes rotatives les plus récentes et les derniers
protocoles de nettoyage dans les trois dimensions,
est également un aspect très important.
En conclusion, davantage d’endodontistes devraient donc adopter ces technologies modernes et
ce concept de préparation conservatrice de l’accès
aﬁn de parvenir à de meilleurs taux de réussite et de
longévité des traitements endocanalaires.

Note de la rédaction : une liste des références est disponible auprès de l’éditeur.

Dr Alfredo Landolo
est un professeur sous contrat au service
d’endodontie de l’université de Naples
Federico II en Italie. Il est possible de le
contacter via son adresse électronique
iandoloalfredo@libero.it.

Dr Dina Abdellatif
est endodontiste, enseignante clinique et
préclinique (service de dentisterie
conservatrice) à l’université d’Alexandrie
en Égypte. Il est possible de la contacter
via son adresse électronique dinaabdellatif81@gmail.com.

Dental Tribune International

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CAS CLINIQUE

Implant Tribune Édition Française | Février 2019

Photodommages de cellules souches de pulpe
dentaire pendant l’exposition au laser 700 fs
Pr Karsten König et le Dr Anton Kasenbacher

Matériel et méthodes
Les cellules souches humaines de pulpe
dentaire d’adultes (fournies par S. Gronthos, NIH, Bethesda, États-Unis) ont été
cultivées dans un milieu Eagle modiﬁé
(MEM) par Gibco BRL Life Technologies
(Paisley, Écosse) avec ajout de FCS à 20 %,
L-glutamine 2 mM, L-ascorbate-2-phosphate 100 μM, pénicilline 100 μg/mL et
streptomycine 100 μg/mL dans une atmosphère de CO2 à 5 % et à 37 °C, dans des ﬂacons pour culture cellulaire (Greiner,
Frickenhausen, Allemagne) de 25 mL et
75 mL. Pour les expériences et la culture, les
cellules ont été traitées avec de
la trypsine à 0,25 %, du glucose 5 mM, de
l’EDTA à 0,05 % dans une solution saline
tamponnée au phosphate (PBS) pendant
5 minutes à 37 °C. Après avoir été décollées
de la base des ﬂacons de culture, les cellules
ont été incubées dans des chambres de
culture cellulaire (MiniCeM, JenLab GmbH,
Jena, Allemagne) pour un examen par microscopie laser. Des études comparatives
ont été menées sur des cellules d’ovaires de
hamster chinois (CHO), que l’on peut se
procurer dans de nombreux laboratoires
internationaux pour servir de cellules de
référence. Les cellules CHO ont été incubées
dans un milieu de Dubeccos – HAM’S F12
(Gibco BRL) avec ajout de FCS à 10 %, de
L-glutamine et d’un mélange d’antibiotiques constitué de pénicilline, de streptomycine et d’amphotéricine B dans une atmosphère de CO2 à 5 % et à 37 °C. La trypsinisation concernait les cellules souches.
Les cellules individuelles ont été marquées par des certaines gravures au diamant sur la face externe du verre de la fenêtre. En cas de détection de dommages cellulaires, ces gravures étaient aisément identiﬁées grâce à la technique de contraste de
phase.
Microscopie laser
Un laser titane-saphir (Ti-Sa) 80 MHz,
Mai Tai (Spectra Physics, Mountain View,
États-Unis) a été utilisé pour effectuer l’examen microscopique au laser femtosecondes dans le spectre du proche infrarouge. La puissance du laser à l’entrée du
microscope et au niveau du plan objectif
(puissance au niveau de l’échantillon) a été
déterminée par l’appareil de mesure de
puissance/énergie Fieldmaster (Coherent,
Santa Clara, États-Unis) et la tête de capteur
au silicium LM-2, le cas échéant modulés
par des ﬁltres gris. Les valeurs mesurées ont
été spéciﬁées comme étant des valeurs corrigées dans le protocole présenté. Cette correction résulte d’une surface de mesure limitée et de conditions d’exposition au
rayonnement modiﬁées dans le milieu par
rapport à l’air.
La microscopie laser a été réalisée au
moyen d’un microscope modiﬁé LSM 410
(Zeiss, Jena, Allemagne) muni d’un objectif
40 x/1.3 à immersion dans l’huile. Le mode
de balayage du microscope 512 x 512 avec
durée de balayage laser de t = 16 s a été utilisé
pour exposer les cellules au rayonnement.
Celles-ci ont été scannées dix fous au niveau
du même plan focal. Ces expériences ont été
réalisées à une longueur d’onde centrale de
800 nm. Après l’exposition au rayonne-

Fig. 1: Système laser femtosecondes avec unité d’étirement des impulsions.

ment, les cellules ont été transférées dans un
incubateur aﬁn de garantir des conditions
optimales à la croissance, à la division cellulaire et au processus de réparation.
Unité d’étirement des impulsions,
génération et mesure des impulsions de
700 femtosecondes (fs)
Aﬁn d’augmenter la durée d’impulsion au
niveau de l’échantillon jusqu’à 700 fs, une
unité d’étirement des impulsions a été installée dans le faisceau de lumière à l’avant
du microscope. Cette unité est constituée de
miroirs revêtus et de deux réseaux de diffraction pulvérisés avec de l’or, agencés en
parallèle avec une constante de diffraction
de 600 lignes/mm. Le second réseau a été
monté sur une platine motorisée avec une
précision micrométrique. La durée des impulsions a été modulée en fonction de la
distance des réseaux. Le faisceau laser a fait
l’objet d’une dispersion spatiale par le premier réseau, qui a été compensée au niveau
du second (Fig. 1).
La durée d’impulsion a d’abord été déterminée à la sortie du laser à l’aide de l’autocorrélateur, modèle Mini (APE, Berlin, Allemagne), à 88 fs à une longueur d’onde centrale d’émission de 750 nm, 80 fs à 800 nm
et 91 fs à 850 nm, hypothèse faite de la présence d’une fonction gaussienne. Généralement, les mesures au niveau du plan focal
de l’objectif s’avèrent complexes en raison
d’une divergence des faisceaux. Une diode
de mesure plane non linéaire a donc été
utilisée, ce qui a simpliﬁé la mesure au plan
focal des objectifs à grande ouverture. La
fonction d’autocorrélation (ACF), qui peut
être adaptée au moyen de programmes
d’analyse par la méthode de Gauss, de
Lorentz ou de la sécante hyperbolique pour
déﬁnir la durée d’impulsion.

Test LIVE/DEAD®
L’examen de la vitalité des cellules
souches de pulpe dentaire (DSPC) a fait
appel à des sondes moléculaires (Eugene,
Oregon, États-Unis). Un mélange de calcéine
AM 2 μM et de l’homodimère d’éthidium
D1 4 μM a été ajouté aux chambres de
culture cellulaire suivi d’une incubation de
20 min à 37 °C. Les cellules vivantes ont été
colorées à la calcéine (qui émet dans le
spectre vert), les cellules mortes l’ont été au
moyen de l’homodimère d’éthidium D1 qui
émet dans le spectre rouge (noyau). La calcéine AM n’est pas un colorant ﬂuorescent qui
s’inﬁltre facilement dans la membrane cel-

Fig. 2 : Taux de dommages induits par laser (létalité).

lulaire des cellules vivantes et elle est transformée par une réaction enzymatique en
calcéine émettant une forte ﬂuorescence
verte incapable de traverser la membrane
cellulaire intacte. L’homodimère d’éthidium
D1 est un agent de coloration des cellules
mortes qui émet une ﬂuorescence rouge. Il
peut uniquement pénétrer dans les
membranes cellulaires endommagées et
son intensité est fortement augmentée par
la liaison à l’ADN. Le kit LIVE/DEAD® a été
incubé durant 5 heures et demie après l’exposition au rayonnement. La ﬂuorescence a
été déclenchée par une excitation à deux
photons.

[7] =>

CAS CLINIQUE

Implant Tribune Édition Française | Février 2019

Nombre total de
cellules irradiées

Cellules avec
taches

Nombre total de
cellules irradiées

Cellules avec
taches

mW Nombre total de Vitales Mortes %
cellules irradiées
létalité

14,5

Table 1 : Apparition de taches noires dans les cellules DPSC.

Table 2 : Apparition de taches noires dans les cellules CHO.

Table 3 : Létalité des cellules DPSC.

Table 4 : Létalité des cellules CHO.

Vériﬁcation de la formation de DRO
induite par laser
La formation de DRO a été examinée in
situ par une excitation à deux photons du
ﬂuorophore dihydro-ﬂuorescéine (DHF),
perméable à la membrane, selon la technique d’Hockberger et coll.2 Pour commencer, les cellules ont été incubées avec le marqueur (10 μM, Fluka, Allemagne) et exposées
à un rayonnement après un temps d’incubation de 15 min. Une seule ROI (région d’intérêt) a été exposée au rayonnement. Les
cellules voisines ont été utilisées en tant
que témoin. Après l’exposition, un balayage
plein cadre a été réalisé à la basse puissance
de 4 mW aﬁn de visualiser l’effet.

été réalisées sur des cellules CHO. Des cellules ou des amas de cellules largement espacés ont été sélectionnés aﬁn de prévenir
autant que possible toute communication
intercellulaire. Pendant le balayage, le signal
de transmission a été détecté et afﬁché sous
forme d’image sur le moniteur. Au total,
325 cellules ont fait l’objet d’un examen
morphologique et d’un test LIVE/DEAD®,
50 cellules ont été examinées pour détecter
les DRO. Les résultats ont été comparés avec
ceux obtenus précédemment lors de l’utilisation d’une durée d’impulsion de 170 fs.

puissance minimale déclenchant l’apparition des taches noires était de 20 mW en ce
qui concerne les cellules DPSC, et de 22 mW
pour ce qui est des cellules CHO (Tableau 2).
À une puissance de 26 mW, 30 % des cellules
DPSC et seulement 15 % des cellules CHO
présentaient ces modiﬁcations morphologiques. De manière générale, les cellules
comportant des taches noires induites par
le laser présentaient des modiﬁcations morphologiques dans les cinq heures suivantes,
indiquant de ce fait des photodommages.

pulsion de 700 fs dans les conditions de
rayonnement spéciﬁées ici qu’à une durée
d’impulsion plus courte de 170 fs. Pour des
paramètres de puissance moyenne de
20 mW, jusqu’à 10 % des cellules ont fait l’objet d’effets létaux dans les six heures suivant l’exposition au rayonnement. À une
puissance moyenne de 26 mW, deux tiers
des cellules étaient encore vivantes. À une
durée d’impulsion plus courte, toutes les
cellules feraient l’objet d’un effet létal.
La sensibilité inférieure observée à des
durées d’impulsion plus longues et à une
énergie d’impulsion constante correspond
aux résultats d’études antérieures sur les
cellules d’ovaires de hamster chinois (CHO)
soumises à un rayonnement d’une longueur d’onde de 780 nm.3 Ces études antérieures ont conclu que les dommages sont
sujets à un effet biphotonique, pour lequel
un effet délétère E peut calculé d’après
l’équation suivante :
E ~ P2/Ĳ
avec P = puissance moyenne du laser et Ĳ =
durée d’impulsion.

Résultats
L’unité d’étirement d’impulsion a été
ajustée de façon à obtenir une durée d’impulsion de 700 fs ± 50 fs pour chaque longueur d’onde laser atteignant le foyer. Des
cellules DPSC individuelles ont été scannées
10 x et l’effet a été comparé avec celui produit sur les cellules voisines non exposées.
Des expériences comparatives ont en outre

Modiﬁcations morphologiques
Des taches noires, telles qu’on les appelle,
sont apparues dans les endroits des cellules
comportant une importante granulation
après une exposition à un rayonnement réglé sur des paramètres de puissance spéciﬁques. La puissance du laser a été progressivement augmentée de 2 mW aﬁn de mesurer la valeur seuil à laquelle apparaissaient
les premières modiﬁcations morphologiques induites par le laser (Tableau 1). Dans
ces conditions et avec un foyer optimal, la

Test LIVE/DEAD®
En premier lieu, les cellules DPSC ont été
exposées à un rayonnement réglé sur différents paramètres de puissance (4 mW,
12 mW, 16 mW, 20 mW et 32 mW). Les cellules
irradiées ont été marquées, incubées après
5 heures et demie avec le kit LIVE/DEAD®,
puis après 1 heure d’incubation, elles ont
été analysées quant à leur comportement
ﬂuorescent. Sous un rayonnement de
20 mW, le cytoplasme de 64 des 69 cellules
DPSC a émis une ﬂuorescence verte, tandis
qu’une ﬂuorescence rouge était observée
dans 5 cellules DPSC (Tableau 3). Cette observation correspond à un dommage de 7 %.
Lorsque la puissance a été augmentée à
26 mW, 35 % des cellules déjà faisaient l’objet
d’un effet létal. Cependant, toutes les cellules CHO ont toléré une puissance de
20 mW, 15 % d’entre elles mourant à 36 mW
(Tableau 4 et Fig. 2). La comparaison avec les
expériences faisant appel à des durées d’impulsions plus courtes, auxquelles déjà 73 %
des cellules DPSC étaient endommagées à
une puissance de 20 mW, indique que la durée d’impulsion de 700 fs, plus longue, est
mieux tolérée par les cellules.
Vériﬁcation de la formation de dérivés
réactifs de l’oxygène (DRO) induits
par le laser
L’exposition au rayonnement n’a entraîné
aucun signal détectable de DHF à une puissance moyenne inférieure à 35 mW. Ainsi
qu’il ressort de la Figure 3 (partie supérieure
de a et b), les signaux DRO ont été détectés à
une puissance plus élevée (37 mW) dans les
cellules irradiées des deux parties supérieures. De faibles signaux ﬂuorescents se
sont également produits dans la cellule non
irradiée de la partie inférieure. Toutefois,
cette cellule était liée aux cellules irradiées
par des contacts membranaires. Si la puissance n’est que très légèrement augmentée,
ses effets deviennent plus marqués. Dans la
Figure 3c, les cellules irradiées présentent
une intensité signiﬁcativement plus élevée.
Cet effet est également conﬁrmé par la
ﬂuorescence considérable de la cellule irradiée (Fig. 3f). Par conséquent, les radicaux
destructeurs de l’oxygène sont formés durant l’exposition à un rayonnement dont la
durée des impulsions est de 700 fs. Par rapport aux expériences réalisées à 170 fs, une
puissance moyenne signiﬁcativement supérieure est nécessaire pour parvenir à une
formation détectable de DRO.

Conclusions
3e

Figs. 3 a–f : Vériﬁcation de la formation de DRO induite par laser.

Les DSPC sont moins sensibles au rayonnement du laser femtosecondes émettant
dans le proche infrarouge à une durée d’im-

En comparaison avec une augmentation
de la durée d’impulsion d’un facteur
F = 700 fs/170 fs = 4, une augmentation de la
puissance d’un facteur S = 1,7 à 2 devrait être
nécessaire pour obtenir le même effet destructeur.
Cette relation ne peut pas être conﬁrmée
avec précision d’après les données présentées mais un facteur S > 1,25 peut être assumé puisque déjà 7 % des cellules DPSC
meurent à une puissance moyenne de
16 mW et à une durée d’impulsion de 170 fs,
mais une puissance de 20 mW à 700 fs a été
nécessaire pour obtenir le même effet.
Les cellules DPSC sont quelque peu plus
sensibles à une durée d’impulsion de 700 fs
que les cellules CHO. Lors d’une exposition
à une puissance du laser de 26 mW, seulement 15 % des cellules CHO ont été endommagées par rapport à 35 % des cellules DPSC.
La formation de DRO détectée indique un
dommage résultant d’un processus photochimique.
Note de la rédaction : Cet article est paru
dans le magazine roots – international
magazine of endodontics, numéro 4/2017.
Une liste des références est disponible auprès
de l’éditeur.

Pr Karsten König
Saarland University
Campus A5.1, Room 2.35
66123 Saarbrücken
Allemagne
Tel.: +49 681 3023451
k.koenig@blt.uni-saarland.de
Dr Anton Kasenbacher
Obere Hammerstr. 5
83278 Traunstein
Allemagne
Tel.: +49 861 4692
a.k@ts-net.de

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